మేము PCR ప్రయోగాలు కూడా చేస్తున్నాము, ఫలితాలు ఎల్లప్పుడూ ఇతరులకన్నా ఎందుకు చాలా ఘోరంగా ఉన్నాయి?
ప్రయోగశాలలో, ఇతరుల PCRని చూడండి, యాంప్లిఫికేషన్ సామర్థ్యం ఎక్కువగా ఉంది, ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ స్ట్రిప్ పర్ఫెక్ట్, మరియు వారి స్వంతంగా చూసుకోండి, చాలా కాలం పాటు చేయడం కష్టం, ప్రతిచర్య చాలా బాగుంది, తప్పుడు పాజిటివ్ పరీక్ష ఫలితం...... ఏమిటి సమస్య?
మా భాగస్వాములలో చాలా మంది వివిధ సమస్యలను కూడా ఎదుర్కొన్నారని నేను నమ్ముతున్నాను.మేము PCR ప్రయోగాలలో గోడలోకి ప్రవేశించినప్పుడు, మేము ప్రతిచర్య వ్యవస్థలోని కారకాలను ఉపచేతనంగా విశ్లేషిస్తాము, అయితే ప్రయోగాలలో వినియోగ వస్తువుల యొక్క ముఖ్యమైన ప్రభావాన్ని మేము తరచుగా విస్మరిస్తాము.
మీ PCR ఫలితం తప్పు, PCR వినియోగ వస్తువులు ముఖ్యమైన కారణం కావచ్చు.ఒకవైపు, వినియోగ వస్తువుల సూక్ష్మ కాలుష్యం లేదా నిరోధకాల పరిచయం ప్రయోగాత్మక కాలుష్యానికి కారణమవుతుంది;మరోవైపు, వినియోగ వస్తువుల సరికాని ఎంపిక కూడా ప్రయోగాత్మక ఫలితాలను దెబ్బతీస్తుంది.
సమస్య మళ్లీ వస్తుంది.అనేక రకాల PCR వినియోగ వస్తువులు ఉన్నాయి, కాబట్టి ప్రయోగం మరింత సున్నితంగా చేయడానికి సరైన వాటిని ఎలా ఎంచుకోవాలి?శ్రద్ధ వహించాల్సిన సమస్యలు ఏమిటి?చింతించకండి, ఈ రోజుI అనేక సంవత్సరాల అనుభవంతో కలిపి, PCR వినియోగ వస్తువుల ఎంపిక సాధారణ సమస్యలను క్రమబద్ధీకరించడం, నేను మీకు సహాయం చేస్తానని ఆశిస్తున్నాను.
Q1: PCR వినియోగ వస్తువులు సాధారణంగా PP మెటీరియల్తో ఎందుకు తయారు చేస్తారు?
Huida: PCR సరఫరాలు సాధారణంగా కారకాలు లేదా నమూనాలతో ప్రత్యక్ష సంబంధంలో ఉంటాయి కాబట్టి, పాలీప్రొఫైలిన్ (PP) పదార్థాలు జీవశాస్త్రపరంగా జడత్వం కలిగి ఉంటాయి, జీవ పరమాణువులకు కట్టుబడి ఉండవు మరియు మంచి రసాయన సహనం మరియు ఉష్ణోగ్రత సహనాన్ని కలిగి ఉంటాయి (121 వద్ద ఆటోక్లాప్ చేయవచ్చు.° C, ఉష్ణ చక్రంలో ఉష్ణోగ్రత మార్పులను కూడా తట్టుకోగలదు).
Q2: వివిధ పరిమాణాల PCR ట్యూబ్లు/ప్లేట్ల మధ్య నేను ఎలా ఎంచుకోవాలి?
HUIDA: ఎంపిక యొక్క ఉద్దేశ్యం: నిర్దిష్ట ప్రయోగాత్మక అవసరాలకు అనుగుణంగా సరైన ఉత్పత్తులను ఎంచుకోండి.PCR ట్యూబ్ యొక్క చాలా పరిమాణం PCR ప్రతిచర్య యొక్క అవసరాలను తీర్చగలదు.దీని ఆధారంగా, ముందుగా తక్కువ వాల్యూమ్ ట్యూబ్ని ఎంచుకోవాలని సిఫార్సు చేయబడింది.తక్కువ వాల్యూమ్ రియాక్షన్ ట్యూబ్/ప్లేట్లో చిన్న ఓవర్ హెడ్ స్పేస్ ఉన్నందున, ఉష్ణ వాహకత మెరుగుపడుతుంది మరియు బాష్పీభవనం తగ్గుతుంది.అదే సమయంలో, చాలా ఎక్కువ లేదా చాలా తక్కువ నమూనాలను జోడించకుండా ఉండటం అవసరం.చాలా తక్కువ ఉష్ణ వాహకత, చిందటం మరియు క్రాస్-కాలుష్యం తగ్గడానికి దారి తీస్తుంది, అయితే చాలా తక్కువగా నమూనా బాష్పీభవన నష్టానికి దారి తీయవచ్చు.
సాధారణ ప్రతిచర్య గొట్టాల లక్షణాలు మరియు వాల్యూమ్లు:
సింగిల్/కంబైన్డ్ ట్యూబ్: 0.5ml, 0.2ml, 0.15ml
96-బావి ప్లేట్: 0.2ml, 0.15ml
384-బావి ప్లేట్: 0.04ml
Q3: నమూనా పరిమాణం తక్కువగా ఉన్నప్పుడు, నేను సింగిల్ పైప్ లేదా కంబైన్డ్ పైప్ని ఎంచుకుంటాను, అయితే కొన్ని ఫ్లాట్ కవర్ మరియు కొన్ని కుంభాకార కవర్ ఎందుకు కలిగి ఉంటాయి?
హుయిడా: నమూనా పరిమాణం తక్కువగా ఉన్నప్పుడు, సింగిల్ ట్యూబ్ లేదా కంబైన్డ్ ట్యూబ్కు ప్రాధాన్యత ఇవ్వబడుతుంది.అయినప్పటికీ, ప్రతిచర్య పరిమాణం పెద్దగా ఉన్నప్పుడు, సింగిల్ ట్యూబ్ ప్రబలంగా ఉంటుంది మరియు వాల్యూమ్ 0.5 mLకి చేరుకుంటుంది.మరియు ఫ్లాట్ కవర్ మరియు కుంభాకార కవర్ ప్రతి ఒక్కటి ప్రయోజనాన్ని కలిగి ఉంటాయి, నిర్దిష్ట క్రింది సమాచారాన్ని సూచించవచ్చు.
సింగిల్ ట్యూబ్: 0.2ml మరియు 0.5ml;సరళంగా నమూనా పరిమాణాన్ని ఎంచుకోవచ్చు.
కనెక్టింగ్ ట్యూబ్: 0.2ml లేదా 0.15ml ఐచ్ఛికం;8 లేదా 12 గొట్టాలు సాధారణం.
ఫ్లాట్ కవర్: qPCR కోసం ఖచ్చితమైన ఫ్లోరోసెన్స్ సిగ్నల్ ప్రసారాన్ని అందించగలదు;మార్కులు రాయడం సులభం.
కుంభాకార కవర్: పీడనం వల్ల కలిగే ప్రతిచర్య ట్యూబ్ యొక్క వైకల్యాన్ని తగ్గించడానికి PCR పరికరం యొక్క హాట్ కవర్తో పరిచయం;అయినప్పటికీ, ఇది ఫ్లోరోసెన్స్ సిగ్నల్ ప్రసారాన్ని ప్రభావితం చేస్తుంది మరియు qPCR ప్రయోగానికి వర్తించదు.
Q4: కొన్ని PCR ప్లేట్లకు స్కర్ట్లు ఎందుకు ఉన్నాయి మరియు కొన్నింటికి ఎందుకు ఉండవు?
హుయిడా: నిజానికి, PCR ప్లేట్ యొక్క స్కర్ట్ ఆటోమేషన్ అప్లికేషన్లకు మెరుగ్గా అనుగుణంగా రూపొందించబడింది, పరికరం కోసం స్థిరమైన మద్దతు మరియు మెకానికల్ ఓర్పును అందిస్తుంది, అలాగే పైపెటింగ్ ప్రక్రియలో అధిక స్థిరత్వాన్ని అందిస్తుంది.
PCR ప్లేట్లు సాధారణంగా నాన్-హెమ్లైన్, హాఫ్-హెమ్లైన్ మరియు ఫుల్-హెమ్లైన్గా విభజించబడ్డాయి.
లేకుండాప్లేట్: చాలా PCR మెషీన్లు లేదా qPCR మెషీన్లకు అనుకూలం, కానీ ఆటోమేషన్ అప్లికేషన్లకు కాదు.పైప్టింగ్ ప్రక్రియలో స్థిరత్వం ఎక్కువగా ఉండదు, కాబట్టి ఇది ప్లేట్ మద్దతుతో ఉపయోగించాల్సిన అవసరం ఉంది.
హాఫ్ స్కర్ట్ ఎడ్జ్ ప్లేట్: లేబుల్ లేదా బార్ కోడ్ అప్లికేషన్ మరియు ఆటోమేటిక్ అప్లికేషన్కు అనుగుణంగా మార్చవచ్చు మరియు మంచి పైపెటింగ్ స్థిరత్వాన్ని కలిగి ఉంటుంది.
ఫుల్ స్కర్ట్ ఎడ్జ్ ప్లేట్: ఆటోమేటెడ్ ప్రయోగాత్మక అప్లికేషన్లకు చాలా సరిఅయినది, బార్ కోడ్ యొక్క లేబుల్ మరియు అప్లికేషన్కు కూడా స్వీకరించవచ్చు.ఇది మంచి యాంత్రిక బలాన్ని కలిగి ఉంది, ఉబ్బెత్తు మాడ్యూల్ PCR పరికరంలో ఉపయోగించవచ్చు మరియు పైపెటింగ్ ప్రక్రియలో అధిక స్థిరత్వాన్ని కలిగి ఉంటుంది.
Q5 :PCR ప్లేట్ల కోసం, మూలలు మరియు లేబుల్లు ఎందుకు ఒకేలా ఉండవు?
హుయిడా: ఇది మూలలో కట్టింగ్ మరియు మార్కింగ్ ప్రభావంపై ఆధారపడి ఉంటుంది.
కార్నర్ కట్టింగ్: PCR ప్లేట్ యొక్క కార్నర్ కట్టింగ్ పొజిషన్ ఎంపిక సులభంగా స్థానానికి తగిన పరికరం యొక్క అవసరాలపై ఆధారపడి ఉంటుంది.
గుర్తింపు: PCR ప్లేట్లపై ఆల్ఫాన్యూమరిక్ మార్కర్లు వ్యక్తిగత బావులు మరియు నమూనా స్థానాలను గుర్తించడంలో సహాయపడతాయి.సాధారణంగా ఎంబోస్డ్ కలర్ డిజిటల్ లోగో లేదా చెక్కిన లోగో కోసం.కొన్ని ఆటోమేటెడ్ అప్లికేషన్ల కోసం, ప్రింటెడ్ మరియు మార్క్ చేసిన రియాక్షన్ ప్లేట్లు మెరుగ్గా సీలు చేయబడతాయి.
Q6: కొన్ని PCR ప్లేట్లు ఎందుకు కుంభాకారంగా ఉంటాయి, మరికొన్ని ఫ్లాట్గా ఉంటాయి?ఏది మంచిది?
హుయిడా: సరిపోయేది ఉత్తమమైనది.రెండు రకాల సాధారణ PCR ప్లేట్లు ఉన్నాయి: ఫ్లాట్ పోర్ మార్జిన్ మరియు హై పోర్ మార్జిన్.
ఫ్లాట్ హోల్ మార్జిన్ రియాక్షన్ ప్లేట్, చాలా PCR ఉపకరణానికి తగినది.
పెరుగుతున్న కక్ష్య అంచులతో కూడిన రియాక్షన్ ప్లేట్లు మెమ్బ్రేన్ సీలింగ్ను సులభతరం చేస్తాయి మరియు నమూనాల మధ్య క్రాస్-కాలుష్యం ప్రమాదాన్ని తగ్గిస్తాయి.
పోస్ట్ సమయం: జూన్-03-2021